由Rui Benedito領(lǐng)導(dǎo)的國家心血管研究中心(CNIC)的一組科學(xué)家開發(fā)了一種名為iSuRe-HadCre的新型遺傳工具，可以高效可靠地誘導(dǎo)整個組織或單個細(xì)胞的精確遺傳改變。這項新技術(shù)將成為生物醫(yī)學(xué)研究的重要工具，利用小鼠模型來修改和了解基因功能。
幾十年來，分析基因功能的金標(biāo)準(zhǔn)方法一直是有條件的cre重組酶遺傳學(xué)，它提供了對基因改變或基因表達(dá)的精確控制。盡管出現(xiàn)了CRISPR/Cas9等新的基因靶向技術(shù)，但小鼠模型中的Cre-Lox系統(tǒng)在生物醫(yī)學(xué)研究中的效率、精度和廣泛適用性方面仍然無與倫比。這種方法允許研究人員在時間和空間上操縱基因表達(dá)，使研究特定組織和特定生物或疾病背景下的基因功能成為可能。
然而，Cre-Lox系統(tǒng)的一個主要缺點是其在cre介導(dǎo)重組的效率和時間控制方面不可避免的可變性，這取決于所使用的特定轉(zhuǎn)基因和固定等位基因。這種可變性需要使用多種和昂貴的遺傳和分子控制來確認(rèn)每個依賴于cre的條件遺傳實驗都按預(yù)期工作。
為了克服這些限制，由Rui Benedito領(lǐng)導(dǎo)的CNIC團隊先前開發(fā)了iSuRe-Cre技術(shù)，這是一種轉(zhuǎn)基因小鼠模型，將永久Cre活性與熒光報告基因的表達(dá)聯(lián)系起來。這克服了假陽性的問題和需要昂貴的額外檢查和控制來驗證對目標(biāo)基因的適當(dāng)修改。然而，第一代iSuRe-Cre等位基因仍然存在局限性，包括在某些細(xì)胞類型中偶發(fā)泄漏，對Cre活性的敏感性相對較低，以及在Cre高表達(dá)和永久表達(dá)的細(xì)胞中可能存在毒性。
在這項新研究中，CNIC團隊開發(fā)了一種名為iSuRe-HadCre的新基因工具，克服了這些限制。第一作者Irene García González說:“該工具使用了一種新型的可誘導(dǎo)雙重組酶基因級聯(lián)，確保熒光報告基因在以前具有但不再具有高Cre活性的所有細(xì)胞中表達(dá)。”
García González解釋說:“Cre的這種短暫表達(dá)足以有效地刪除loxP兩側(cè)的所有基因，同時避免Cre永久表達(dá)引起的毒性。此外，新系統(tǒng)在任何細(xì)胞類型中都沒有泄漏，并且對CreERT2及其配體他莫昔芬的誘導(dǎo)更加敏感。”
Rui Benedito預(yù)測，“iSuRe-HadCre的這些特點和優(yōu)越的性能將使其成為所有實驗室使用小鼠模型進行條件遺傳研究不可或缺的工具。”
Benedito補充說，iSuRe-HadCre“對于成像研究、單細(xì)胞遺傳分析和需要同時高效可靠地修改多個基因的遺傳上位性研究尤其有價值。”
（文章來源：www.ebiotrade.com/newsf/2024-6/20240612035617475.htm） | 
